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产品概述
本产品为实时荧光定量 PCR 扩增的预混合溶液，反应液中已包含 Taq enzyme mix、SYBR Green I、dNTP、Mg2+、Rox 以及优化的缓冲体系， 配制 qPCR 反应时只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了操作步骤，降低污染概率，提高了实验的可重复性及结果稳定性。
产品特点&优势
—通用性强：本产品已调整最优 ROX 添加比例，无需单独添加 ROX 染料，适用于不同型号荧光定量 PCR 仪；
—复杂模板兼容性好：除保证常规荧光定量扩增效果外，对于高 GC 含量（≤78%）的扩增片段，扩增效果极好；
—灵敏度高：对于高表达量基因（如内参），可在低至1pg的cDNA中检测到目的基因；
—稳定性好：本试剂经过严苛的反复冻融及温控实验，经20次反复冻融或在37℃条件下保存15天性能无明显下降；
—扩增效率高：试剂中添加了防止引物二聚体形成的优化因子，因此能够提高扩增效率；
产品组成
实验案例
1. 产品兼容性高，适用于不同qPCR仪
以293T细胞cDNA为模板，稀释10倍梯度在不同仪器上扩增基因A得到的扩增曲线及溶解曲线，如图所示，YoungGEN #QP101A可兼容不同机型：Step One Plus（High ROX）、Applied Biosystems QuantStudio 6 （Low ROX）、BIOER LineGene 9600 Plus（Without ROX）。
2. 基因适用范围广
以 293T 细胞 cDNA 为模板，分别采用正常 GC 含量（48%）（左）和高 GC 含量（78%）（右）引物序列进行测试，结果显示， YoungGEN #QP101A 梯度扩增良好、兼容性高、处于优势。
3. 稳定的平行性
以 293T 细胞 cDNA 为模板，选取β-actin 进行复孔平行性测试，如图所示，YoungGEN #QP101A平行性好，可靠程度高。
4. 梯度扩增灵敏度高
以293T细胞cDNA为模板，将50 ng/ul浓度模板进行6个10倍梯度稀释后扩增基因内参基因，得到如上所示的扩增曲线（左）。将6个梯度扩增所得CT值制成标准曲线（右），结果显示即使模板量低至1ng，仍然呈现极好的扩增效率。
5. 不同样本稳定性好
以鼠肝cDNA为模板，将50 ng/uL浓度模板进行6个10倍梯度稀释，在Step One Plus（High ROX）、Applied Biosystems QuantStudio 6 （Low ROX）、BIOER LineGene 9600 Plus（Without ROX）不同机型扩增基因B得到如上所示的曲线。
保存条件
-30~-15℃保存，干冰/-20℃运输。
1. 熔解曲线出现非特异峰
目的峰前面，Tm=75左右出现的峰为引物二聚体峰；紧挨着目的峰前后，有可能是非特异产物峰或者gDNA扩增峰；分析如下：
1) 引物设计不优，需根据设计原则设计合成新的引物。
2) 引物浓度太高：适当降低引物浓度。
3) 检测的目的基因同源家族基因较多，重新设计引物或采用探针法进行定量检测；
4) cDNA模板带有基因组污染：重新制备cDNA模板。
2. 扩增曲线形状异常
1) 扩增曲线不光滑：信号太弱，经系统矫正后产生。提高模板浓度重复实验。
2) 扩增曲线断裂或下滑：模板浓度较高，基线的终点值大于CT值。减小基线终点(C T值 - 4)，重新分析数据。
3) 个别扩增曲线突然骤降：反应管内留有气泡。处理样本时要注意离心，进行扩增反应之前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。
3. 反应结束无扩增曲线出现
1) 反应循环数不够：一般设置循环数为40，但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号，降低数据可信度。
2) 确认程序中是否设置了信号采集步骤：两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段；三步法扩增程序应当将信号采集设置在72°C
延伸阶段。
3) 确认引物是否降解：长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性，以排除其降解的可能。
4) 模板浓度太低：减少稀释度重复实验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。
5) 模板降解：重新制备模板，重复实验。
4. CT值出现太晚
1) 扩增效率极低：优化反应条件，尝试三步法扩增程序，或者重新设计合成引物。
2) 模板浓度太低：减少稀释度重复实验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。
3) 模板降解：重新制备模板，重复实验。
4) PCR产物太长：推荐PCR产物长度为80-150 bp。
5) 体系中存在PCR抑制剂：一般为模板带入，加大模板稀释倍数或者重新制备模板重复实验。
5. 阴性对照出现明显扩增
1) 反应体系污染：更换新的Mix、ddH 2 O、引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。
2) 引物二聚体的出现：配合熔解曲线进行分析。
6. 绝对定量时标准曲线线性关系不佳
1) 加样误差：提高模板稀释倍数，提高加样体积。
2) 标准品降解：重新制备标准品，重复实验。
3) 模板浓度太高：提高模板稀释倍数。
7. 实验重复性差
1) 加样体积失准：使用性能较好的移液枪；将模板做高倍稀释，以大体积加入反应体系中。
2) 定量PCR仪不同位置温度控制不一致：定期校准仪器。
3) 模板浓度太低：模板浓度越低，重复性越差，减少模板稀释度或提高加样体积。
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